第四章 工業微生物產生菌的分離和篩選

　　菌種分離：將一個混雜著各種微生物的樣品通過分離技術區分開，并按照實際要求和菌株的特性采取迅速、準確、有效的方法對他們進行分離、篩選，進而得到所需要的微生物的過程。

　　菌種的篩選和分離包括兩大部分：

　　一、從自然界分離所需要的菌株，

　　二、把分離到的野生型菌株進一步純化并進行代謝產物鑒別。

　　菌種的分離和篩選一般分為采集、富集、分離、產物鑒別幾個步驟。

　　菌株的來源與途徑

　　1、從菌種保藏機構或個人購買有關菌種，從中篩選所需菌株。

　　2、從發酵制品中分離篩選目的菌種。

　　3、從自然界中采集樣品，如土壤、水、動植物體……，從中分離篩選。

　　菌種采樣原則：1、菌種用于生產的目的；2、分布特點；3、生理生化特征。

　　三、對工業微生物的基本要求

　　1、純種培養，2、穩定的遺傳性，3、傳代方便，4、生長快、易放大，5、代謝快、易產生目的產物，6、自我保護、環境適應性強，7、產量高、并易與副產物分離。

　　第二節 含微生物樣品的富集培養

　　富集培養是在目的微生物含量較少時，根據微生物的生理特點設計一種選擇性培養基，創造有利的生長條件，使目的微生物在更適的環境下迅速的生長繁殖，數量增加，由原來自然條件下的劣勢種變成人工環境下的優勢種，以利分離到所需的菌株。

　　一、控制培養基的營養成分

　　（1）特定培養基：微生物對于C、N無機鹽及微生物等要求有差異，異樣型微生物只能利用有機C源，自養型微生物可利用CO2作為C源。

　　（2）若選用直接利用淀粉的糖化菌種可用淀粉作為C源。

　　二、控制培養條件

　　1、PH：細菌、放線菌偏堿（7.0——7.5）；霉菌、酵母菌偏酸（4.5——6.0）。

　　2、溫度

　　三、抑制不需要的菌類

　　第三節 微生物的分離

　　一、好氧微生物的分離

　　（一）粗放——菌落純

　　1、稀釋涂布法

　　2、劃線分離法（簡便、快）

　　3、組織分離法[1、對一般有病組織的分離方法；2、食用菌孢子分離法]

　　（二）細分——菌株純、細胞純（復雜）

　　1、利用平皿的生化反應進行分離  [透明圈法、變色圈法、生長圈法、抑菌圈法]

　　2、單細胞或單孢子分離法

　　二、通過控制營養和培養條件進行分離

　　三、厭氣菌的分離

　　利用平皿的生化反應進行分離：是一類特殊的分離培養基對大量混雜微生物進行初步分離的方法。培養基是根據目的微生物特殊的生理特性或利用某些代謝產物生化反應來設計的。

　　第四節 野生型菌株的篩選和目的產物的鑒別

　　野生型菌株：直接從自然界樣品中分離出來的具有一定生產性能的菌株，它是發生突變前的原始菌株。

　　一、初篩——[快速、簡便、準確、不漏篩]    

　　1、快速（盡快預測所篩選的目的微生物），

　　2、經濟（通過1次篩選得到的具有的廣泛目標的微生物）

　　菌種初篩的方法：稀釋涂布法、稀釋平板法、劃線分離法。

　　二、復篩——一個菌株通常要重復3——5個瓶，培養后的發酵液采用精確分析方法測定。

　　搖瓶發酵篩選

　　三、再復篩：取復篩后發酵單位高的。

　　初篩的簡化：1、平皿快速檢測法；2、從菌體形態變異分析。

　　相關鏈接：2013年自考《微生物遺傳學》考點